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                  新城疫抗體檢測試劑盒(阻斷ELISA)



                  產品編號:100601


                  檢測方法:Elisa試驗


                  檢測樣品:血液


                  規格:96T/192T




                    

                  新城疫抗體檢測試劑盒(阻斷ELISA)




                  新城疫抗體檢測試劑盒

                  使用說明書

                  版號:NDV 141220

                  介紹

                  新城疫(newcastle disease,ND)抗體檢測試劑盒用于檢測禽類血清中的新城疫抗體,評估新城疫疫苗免疫狀況及感染禽的血清學輔助診斷。

                  本試劑盒采用阻斷ELISA法,可檢測雞、鴨、鴿子等禽類血清中的新城疫抗體。在酶標板條微孔上預包被新城疫抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經過溫育后,若樣品中含有新城疫抗原特異性抗體,則與包被板上的抗原結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后;再加入酶標記的抗新城疫抗體,樣本中的抗體阻斷了酶標抗體與包被板上抗原的結合;經洗滌除去未結合的酶結合物;在微孔中加入TMB底物液,經酶催化產生的藍色信號與樣本中的抗體含量成反比,加入終止液終止反應后,用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

                   

                  組份

                  1

                  抗原預包被板條

                  1/2

                  6

                  終止液

                  6/11ml

                  2

                  酶結合物

                  11/22ml

                  7

                  陰性對照

                  1/2ml

                  3

                  10倍濃縮洗滌液

                  50/100ml

                  8

                  陽性對照

                  0.5ml/1ml

                  4

                  顯色液

                  11/22ml

                  9

                  封板膜

                  2/4

                  5

                  樣本稀釋液

                  100ml

                  10

                  說明書

                  1

                  需自備的設備及試劑

                  1. 微量移液器:10μl-100μl、100μl-1000μl。

                  2. 一次性移液器吸頭。

                  3. 量筒:500ml。

                  4. 96孔板酶標儀。

                  5. 蒸餾水或去離子水。

                  6. 洗瓶或洗板機。

                   

                  樣品制備

                  取動物全血,按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

                   

                  洗滌液的準備

                  濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,如有鹽結晶,搖動使結晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

                   

                  注意事項

                  1. 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,應將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應搖勻,使用后放回2-8℃。

                  2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應防止試劑污染。

                  3. 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應該注意防護。

                  4. TMB(顯色液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

                  5. 檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8)。

                  6. 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

                  7. 嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

                  8. 抗原包被板為一次性用品,不得重復使用;

                   

                  操作步驟

                  1. 每次試驗均設置陽性對照1孔、陰性對照2孔,陰、陽性對照不用稀釋,直接取100ul加入反應孔。

                  2. 將樣品稀釋液按90ul/孔加入到微孔反應板內,之后將待檢樣品血清按10ul/孔加入孔內并吹打混勻(移液器槍頭請勿混用);

                  3. 蓋上封板膜(可按實際需要自行裁剪),置37℃溫育60分鐘。

                  4. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內液體,以上步驟重復4-6次,最后在干凈吸水紙上拍干。

                  5. 每孔加酶結合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育60分鐘。

                  6. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌4-6, 方法同4。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

                  7. 每孔加顯色液100μl,輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。

                  8. 每孔加終止液50μl,使反應終止,10分鐘內測定結果。

                   

                  結果判定

                  用酶標儀于450nm630nm作參比波長)讀取吸光度OD值。

                  試驗成立的條件是:

                  陰性對照(NOD>0.4;

                  計算方法:

                  樣品OD/陰性對照OD均值=S/N值。

                  陰陽性判斷:

                  S/N≥0.5則判斷為陰性;

                  S/N<0.5則判斷為陽性。

                   

                  有效期

                  貯存方法: 2 - 8oC下貯存。

                  有效期: 12個月。

                   


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