雞馬立克氏病抗體檢測試劑盒(間接ELISA)

介紹

雞馬立克氏病病毒抗體檢測試劑盒檢測雞血清中的雞雞馬立克氏病病毒抗體，用于評估養雞場雞馬立克氏病疫苗免疫狀況及感染雞的血清學輔助診斷。

本試劑盒采用間接ELISA法，在酶標板條微孔上預包被純化的雞馬立克氏病病毒。在試驗中，加入稀釋后的待檢血清，經過溫育后，若樣品中含有雞馬立克氏病病毒特異性抗體，則與包被板上的抗原結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標二抗，與檢測板上的抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶結合物；在微孔中加入TMB底物液，經酶催化形成藍色產物，加入終止液終止反應后，用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

組份

需自備的設備及試劑

微量移液器： 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

一次性移液器吸頭。

量筒：500ml。

96孔板酶標儀。

蒸餾水或去離子水。

洗瓶或洗板機。

樣品制備

取動物全血，按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

洗滌液的準備

濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫，如有鹽結晶，搖動使結晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

樣品的稀釋

在血清稀釋板中按1：99的體積比稀釋待檢血清（例如：495μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清）。

注意：陰性和陽性對照不用稀釋。取每個樣品后都要更換吸頭，準確記錄每個樣品在板上的位置。每個樣品在加入到包被板微孔前應充分混勻。

注意事項

試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫，使用前應搖勻，使用后放回2-8℃。

不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應防止試劑污染。

底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應該注意防護。

TMB（底物B液）不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2～8℃)。

所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

血清稀釋板為一次性用品，不得重復使用；血清稀釋板的最大容量為300μl/孔。

操作步驟

1. 取預包被的檢測板（根據樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設陰性、陽性及空白對照各1孔，取陰性及陽性對照各100μl

分別加入反應孔中，空白對照僅加入100μl樣本稀釋液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。

2. 蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。

3. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，加滿液體后停留1分鐘，后甩去孔內液體，以上步驟重復3次，最后在干凈吸水紙上拍干。

4. 每孔加酶結合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。

5. 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌3次, 方法同3。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

6. 每孔先加底物液50μl、再加顯色液50μl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

1. 每孔加終止液50μl，使反應終止，10分鐘內測定結果。

結果判定

以空白對照調零用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度A值。試驗成立的條件是陽性對照孔A450值大于或等于0.6，陰性對照孔A450值必須小于0.15。如果試驗無效，試驗中的操作值得懷疑，試驗應重做，并仔細檢察各組分。

樣品A450值大于0.2+陰性對照孔均值，判為陽性；樣品A450值小于0.2+陰性對照孔均值，判為陰性；如陰性對照孔均值小于0.05按0.05計算。

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個月。